Определение глюкозы в сыворотке в крови: глюкозооксидазный и гексокиназный методы

Глюкозооксидазный и гексокиназный методы определения глюкозы в сыворотке в крови

Определение глюкозы в сыворотке в крови: глюкозооксидазный и гексокиназный методы

Точная постановка диагноза, назначение лечения требуют проведения ряда лабораторных исследований.

Метод определения глюкозы в сыворотке крови – важнейший инструментарий в выявлении гипер- и гипогликемии у больных сахарным диабетом.

Способ позволяет корректировать медицинскую терапию данных метаболических нарушений. Определить уровень глюкозы диагностическим путем можно также в цельной крови и ее плазме.

Методики определение глюкозы в крови

Методик для определения количества глюкозы в крови разработано много.

Некоторые из них (редуктометрические, колориметрические) практически не применяются из-за высокой токсичности и низкой точности результатов.

Чаще всего используют ферментативные исследования. Глюкозооксидазный способ – метод цветной реакции, происходящей при нагревании углеводов. Гексокиназный определяет активность крови на гексокиназу.

Глюкозооксидазный метод

Глюкозооксидазный метод определения глюкозы в крови основан на ее реакции окисления под воздействием фермента. При этом образуется перекись водорода, она окрашивает вещество хромоген, по концентрации которого определяют количество глюкозы.

Глюкозооксидазный метод применяют при:

  • наследственной непереносимости фруктозы;
  • пентозурии;
  • непереносимости лактулозы.

Недостаток исследования в том, что перекись водорода способна окислять как хромоген, так и присутствующую в крови аскорбиновую, мочевую кислоту, билирубин. Рассчитывают количество глюкозы фотометрическим способом, данные интенсивности окрашивания сопоставляют с калибровочным графиком.

В лабораторных условиях определить уровень вещества можно:

  1. в венозной крови. Используются автоматические анализаторы;
  2. в капиллярной крови. Забор осуществляют из пальца.

Электрохимический способ заключается в использовании электродов с содержанием глюкозооксидазы. Определяется количество образовавшейся перекиси водорода, либо оставшийся уровень кислорода, расходуемого в процессе окисления.

Диагностические полоски применяются в домашних условиях, в их основе лежит глюкозооксидазно‑пероксидазная реакция, в качестве хромогена выступает бензидин.

Гексокиназный способ

Гексокиназный метод основан на биохимической реакции, которая позволяет определить степень активности гексокиназы в сыворотке крови.

Вещество является важнейшим ферментом метаболизма глюкозы, лимитирующим скорость процесса в клетках.

В лабораторных условиях под действием гексокиназы глюкоза фосфорилируется за счет аденозинтрифосфорной кислоты.

В результате реакции образуются органические молекулы, количество которых определяют по уровню светопоглощения в ультрафиолетовой зоне. Слишком быстрая положительная гексокиназная реакция может также являться признаком возникновения злокачественных опухолей.

Подготовка к анализу

Исследования сыворотки крови на глюкозу назначают при:

Перед анализами нужно соблюдать ряд условий, чтобы результаты были максимально достоверными:

  1. исследование проводится натощак. Материал берут в утреннее время;
  2. за пару дней до диагностики нужно избегать тяжелой физической нагрузки, стресса;
  3. в суточном рационе пациента должно присутствовать не менее 150 грамм углеводов. При недостатке будет расти уровень глюкозы, а падает он медленно, что искажает данные анализа;
  4. за сутки до диагностики нельзя курить и пить алкогольные напитки;
  5. нельзя проводить исследование после тяжелых операций, родов, при наличии воспалений. Противопоказан анализ при циррозе печени, обострении болезней желудка, опухолевых процессах;
  6. за пару дней до исследования не следует проходить физиотерапевтические процедуры, принимать оральные контрацептивы, мочегонные препараты, психотропные средства, кофеин.

Состояние натощак определяется как промежуток между приемами пищи не менее восьми часов. Забор крови осуществляют после ночного воздержания от еды.

Анализ может дать ложный положительный результат при гипокалемии и эндокринных болезнях (синдроме Кушинга, тиреотоксикозе).

Нормы глюкозы в сыворотке крови по возрастам

Нормальные показатели зависят от возраста:

  • в пуповинной крови может присутствовать от 2,5 до 5,3 ммоль/л;
  • у недоношенных детей – от 1,1 до 3 ммоль/л;
  • у детей первого дня жизни – от 2,22 до 3,33;
  • в месячном возрасте от 2,7 до 4,4;
  • в детском возрасте старше 6 лет – от 3,3 до 5,5 ммоль/л;
  • у взрослых до 60 лет – от 4,4 до 6,3;
  • у пожилых людей – от 4,6 до 6,1 ммоль/л.

Гипогликемия у взрослых диагностируется при показателях глюкозы меньше 3,3 ммоль/л, а гипергликемия – больше 6,1 ммоль/л

О чем говорит повышение/понижение показателя

Гипергликемия (подъем уровня глюкозы в крови) наблюдается при:

  • нарушении гормональной функции гипофиза, щитовидной железы: тиреотоксикозе, акромегалии, синдроме Кушинга;
  • недугах поджелудочной железы: диабете, панкреатите, муковисцидозе, опухолевых явлениях, гемохроматозе;
  • заболеваниях печени, почек;
  • нарушениях деятельности нервной системы: кровоизлияниях, опухолях, травмах мозга;
  • отравлениях эфиром, синильной кислотой;
  • при менингите, эпилепсии;
  • сердечных недугах: инфаркте миокарда, стенокардии;
  • дефиците витамина В 1;
  • сильных ожогах.

Гипогликемия наблюдается у пациентов с:

  • опухолью панкреатических островков, дефицитом глюкагона;
  • повреждениями печени, которые вызваны отравлением мышьяком, алкогольными напитками, антигистаминными таблетками, фосфорными, ртутными соединениями, бензолом, парацетамолом;
  • недугами печени, когда нарушены гликогенообразование, глюконеогенез;
  • эндокринными нарушениями: аддисоновой болезнью, гипотиреозом;
  • болезнями почек, кишечника, обусловленными нарушением всасывания.

по теме

Об определении глюкозы в сыворотке в крови в видео:

Определение уровня глюкозы необходимо для точной постановки диагноза и коррекции лечения при сахарном диабете. Гексокиназный способ анализа подразумевает определение активности гексокиназы в сыворотке крови. Глюкозооксидазный метод определяет количество вещества в плазме, спинномозговой жидкости.

Делается анализ натощак. Накануне исследования нельзя заниматься сильным физическим трудом, употреблять алкоголь и курить. Суть метода заключается в изучении реакции окисления глюкозы с участием фермента глюкозооксидазы, в ходе которой образуется перекись водорода.

Чаще всего способ применяют в эндокринологических отделениях стационаров. Обследование проводят с помощью автоматического анализатора, фотометра. В экстренной ситуации применяют портативные глюкометры.

Гексокиназный метод определения глюкозы

Определение глюкозы в сыворотке в крови: глюкозооксидазный и гексокиназный методы

Основным показателем углеводного обмена является глюкоза. Измерение сахара в крови помогает в определении различных заболеваний, в частности таких как сахарный диабет и всевозможные болезни крови. Чтобы предотвратить многие недуги врачи рекомендуют держать уровень глюкозы в пределах нормы.

Методы

Есть несколько методов, которые могут быстро измерить уровень сахара в крови. Наиболее популярными считаются:

  • Ферментативный;
  • Гексокиназный метод.

https://www..com/watch?v=ytcopyrightru

Раньше использовались также редуктометрический и колорометрический, но из-за токсичности и низкой точности они больше не используются в современной медицине.

Ферментивный метод определения глюкозы в крови условно делится на:

  • глюкозооксидазный
  • гексокиназный

Определение глюкозы в крови глюкозооксидазным методом используется еще с начала века.Он популярен тем, что использует ферменты для получения результата. То есть, основывается на реакции окисления глюкозы в крови или моче. А также по результатам с использованием плазмы крови.

Простота метода заключается также в том, что результат очень быстро можно получить при помощи биохимического фотометра, так и автоматическим анализатором.Такой метод специалисты считают наиболее точным, а для анализа необходима кровь или сыворотка крови.

У него также есть некоторые недостатки: во время анализа, перекись водорода, которая образуется от синтеза, может значительно занижать результаты глюкозы.

Поэтому такой метод считают линейным, с ошибкой в 30ммоль/л.

Гексокиназный метод

Такой метод считают референтным по измерению уровня глюкозы в крови, но наиболее точным, так как не взаимодействует с компонентами сыворотки крови. Чаще всего этот метод используют в эндокринологических отделениях.Сотрудники лаборатории могут предложить способы проведения такого анализа:

  • провести обследование при помощи автоматического биохимического анализатора;
  • автоматический фотометр, который используют в небольших лабораториях;
  • в экстренных ситуациях удобным будет карманный глюкометр (One Touch).

Достаточно быстро можно определить уровень глюкозы в крови каждого человека.

При помощи портативных глюкометров и быстрым биохимическим анализом в лаборатории.

Проводить анализ крови можно в лаборатории или в домашних условиях. Почти все методы лабораторных анализов предполагают забор крови из вены или пальца. И хоть данный анализ не требует специальной подготовки. Есть факторы, которые могут повлиять на результаты:

  • Сильная физическая нагрузка накануне сдачи анализа.
  • Сильное эмоциональное потрясение.
  • Переедание или чрезмерное употребление алкогольных напитков.
  • Также стоит помнить о том, что не следует перед анализом крови 2-3 дня использовать лекарственные препараты.

Если кровь для анализа берут из вены, делать это нужно утром, натощак.

Если же для анализа используют кровь из пальца, ее забор можно совершать в любое время суток.На качество лабораторного исследования могут влиять такие факторы:

  • время забора крови;
  • материал пробирок или качество системы для забора крови;
  • положение тела пациента;
  • квалификация медицинских сотрудников.

ИНСТРУКЦИЯ

поприменению набора реагентов дляколичественного определения содержанияглюкозы в сыворотке и плазме кровичеловека глюкозооксидазным методом

«ГЛЮКОЗА- UTS»

Набор«ГЛЮКОЗА – UTS»разрешен кпроизводству, продаже и применению натерритории РФ.

https://www..com/watch?v=ytdevru

Регистрационноеудостоверение № ФСР 2009/05457

Информация длязаказа набора «ГЛЮКОЗА – UTS»

Кат. №КомплектацияКоличество определений
ГЛ-09-004-100реагент 100 мл калибратор 1 мл100/v
ГЛ-09-004-400реагент 400 мл калибратор 4 мл400/v

гдеv– объем фотометрической ячейкианализатора.

1.НАЗНАЧЕНИЕ

1.1.Набор реагентов «ГЛЮКОЗА- UTS» предназначендля определения концентрации глюкозыв сыворотке и плазме крови человека вклинико-диагностических и биохимическихлабораториях для целей диагностикизаболеваний и контроля проводимоголечения пациентов.

1.2.Глюкоза является одним из важнейшихкомпонентов крови, ее количество отражаетсостояние углеводного обмена. глюкозы в крови повышается присахарном диабете, эпидемическомэнцефалите, повышении гормональнойактивности щитовидной железы и т.д. Наэтом основано клиническое значениеанализа.

1.3.Потенциальный риск применения набора– класс 2а.

Для снижения указанного рисканеобходимо в каждой аналитической серииконтролировать качество результатованализов с применением контрольныхсывороток в соответствии с ОСТ91500.13.0001-2003.

2.ПРИНЦИП МЕТОДА

2.1. Глюкозооксидазакатализирует окисление β-D-глюкозы собразованием эквимолярных количествглюконовой кислоты и перекиси водорода(1).

Перекись водорода под действиемпероксидазы в реакции с 4-аминоантипирини фенолом образует окрашенный продукт– хинонимин (2), интенсивность окраскикоторого пропорциональна концентрацииглюкозы в анализируемом образце иизмеряется фотометрически при длиневолны 505 (490-550) нм [1,2].

β-D-Глюкоза H2O O2 Глюкозооксидаза Глюконовая кислота Н2О2(1)

2Н2О2 4-аминоантипирин Фенол ПероксидазаХинонимин 4Н2О (2)

2.2.Фотометрическое измерение основано наналичии пика поглощения с максимумомпри длине волны 505 нм молекуламихинонимина. Все остальные компонентыреакционной смеси слабо поглощают светпри этой длине волны. Таким образом,увеличение оптической плотностиреакционной смеси пропорциональноинтенсивности окраски хинонимина и,следовательно, прямо пропорциональноконцентрации глюкозыв пробе.

3.СОСТАВ НАБОРА

3.1.Набор реагентов «ГЛЮКОЗА- UTS» поставляетсяв виде двух растворов: Реагента икалибратора.

НаименованиеСоставКонцентрация
РеагентФосфатный буфер, pH 7,5ФенолГлюкозооксидазаПероксидаза4-аминоантипирин100 ммоль/л5 ммоль/л{amp}gt;10 000 MЕ/л{amp}gt;2 000 MЕ/л0,5 ммоль/л
КалибраторВодный раствор глюкозы5,55 ммоль/л

4.1.Набор обеспечивает линейную областьопределения концентрации глюкозыв диапазоне от 0,5 до 25 ммоль/л, отклонениеот линейности не превышает 2,5%.

4.2. Чувствительность– не более 0,5 ммоль/л

4.3. Воспроизводимость- коэффициент вариации результатовопределений – не более 2,5%.

4.4.Качество набора можно оценивать поотечественным или зарубежным контрольнымсывороткам, аттестованным глюкозооксидазнымметодом.

4.6.Нормальные величины концентрацииглюкозыв сыворотке или плазме взрослого человекасоставляют 4,1-5,9 ммоль/л [3].

4.7.Перечень лекарственных препаратов,влияющих на определение концентрацииглюкозы,приведены в обзоре [4].

5.1.Реагентсодержит фенол и 4-аминоантипирин.Следует избегать попадания этих реагентовна кожу и слизистые. В случае попаданияих на кожу и слизистые оболочки необходимопромыть поражённые участки большимколичеством проточной воды.

5.2.  Привыполнении лабораторного исследованиянеобходимо соблюдать «Правила устройства,техники безопасности, производственнойсанитарии, противоэпидемического режимаи личной гигиены при работе в лабораториях(отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологическихучреждений системы Министерстваздравоохранения СССР» (Москва, 1981 г.).

5.3.При работе с биологическими пробамиследует надевать одноразовые резиновыеили пластиковые перчатки, т.к. образцыкрови человека следует рассматриватькак потенциально инфицированные,способные длительное время сохранятьи передавать ВИЧ, вирусы гепатита илилюбой другой возбудитель вируснойинфекции.

Для выполнения анализа по определениюконцентрации глюкозыс применением набора реагентов «ГЛЮКОЗА– UTS»рекомендуется использовать фотометр,фотоэлектроколориметр, полуавтоматическийили автоматический биохимическийанализаторы, позволяющие выполнятьизмерение поглощения оптическойплотности при длине волны 505 (490-550) нм(режим по конечной точке), и обеспечивающиетермостатирование фотометрическойячейки при температуре

(37±0,5)ОС.

6.2. Общелабораторноеоборудование.

https://www..com/watch?v=https:accounts.google.comServiceLogin

7.1. Негемолизированнаясыворотка или плазма крови.

7.2. Сыворотку илиплазму крови следует отделить отформенных элементов крови немедленнопосле взятия крови.

7.3.Для замедления гликолиза и предотвращениясвертывания при заборе крови использоватьпробирки, содержащие антикоагулянтфторид натрия.

7.4.Образцы сыворотки или плазмы дляпроведения анализа на содержание глюкозыстабильны не более 3-х суток при (2-8) ОС[3].

8.1. Реагент икалибратор готовы к использованию.

8.2.Проведениеручного анализа с использованиемфотометра или фотоэлектроколориметра.
Анализируемая проба, мклКалибровочная проба, мкл
Реагент100010001000
Калибратор10
H2O10
Сыворотка или плазма крови10

8.4.Пробы тщательно перемешать и инкубироватьпри температуре (37±0,5) ОСв течение 5 минут или при комнатнойтемпературе ( 18… 25 ОС)в течение 10 минут.

8.5.Измерить оптическую плотностьанализируемой пробы и калибровочнойпробы против холостой пробы в оптическойкювете при длине волны 505 (490-550) нм. Окраскараствора стабильна в течение 30 минут.

где: С – концентрация глюкозы в анализируемомобразце сыворотки или плазмы в моль/л;

Акал–оптическая плотность калибровочнойпробы отн. холостой пробы, ед. опт. плотн.;

Cкал–концентрация глюкозы в калибраторе,равная 5,55 ммоль/л.

https://www..com/watch?v=ytpolicyandsafetyru

8.6. Если полученнаяконцентрация глюкозы в образце выше25 ммоль/л, то исследование следуетповторить: разбавить анализируемыйобразец 0,9% раствором NaCl в соотношении1:1 и полученный результат определенияумножить на 2.

Наименование параметраЗначение
Метод измеренияКонечная точка
Длина волны, нмОсновная 505 (490-550), дифференциальная 600
Измерение противдист. вода
Температура реакции37 ОС
Единица измеренияммоль/л
Число знаков после запятой2
Изменение оптической плотностиУвеличивается
Соотношение реагент/проба100:1
Концентрация калибратора, ммоль/л5,55
Время реакции, мин5 (37 ОС)
Верхний предел абсорбции реагента против воды, ед. опт. плот.0,3
Нижний предел абсорбции реагента против воды, ед. опт. плот.0
Границы линейности, ммоль/л0,5-25
Максимум нормы, ммоль/л5,9
Минимум нормы, ммоль/л4,1
Гликемия, ммоль/л4,5681012141719
HbAIc, %56789101112

В норме содержание HbAIc в крови составляет 5- 7% от общего уровня гемоглобина. У 6% лиц, не болеющих сахарным диабетом, выявляется повышение уровня гликозилированного гемоглобина. Уровни HbAIc, свидетельствующие о качестве компенсации заболевания при инсулинотерапии, представлены в табл.

Гемоглобин HbAIc является самой важной подгруппой фракции гемоглобина НвА1, состоящей из 3 компонентов ( Уровни гликозилированного гемоглобина НвА1 в крови на 1,5-2% выше, чем HbAIc. У больных с хорошей компенсацией сахарного диабета он находится в пределах 8,5-11%.

На показатель гликозилированного гемоглобина могут влиять такие патологические состояния, как анемия, полицитемия, гемоглобинопатии.

Глюкоза

Определение глюкозы в сыворотке в крови: глюкозооксидазный и гексокиназный методы

Наиболее распространенный углевод в животном организме — глюкоза. Она играет роль связующего звена между энергетическими и пластическими функциями углеводов, поскольку из глюкозы могут образовываться все другие моносахариды, и наоборот — различные моносахариды могут превращаться в глюкозу.

Более 90% всех растворимых низкомолекулярных углеводов крови приходится на глюкозу; кроме того, в небольших количествах могут присутствовать фруктоза, мальтоза, манноза и пентозы, а при патологии и галактоза. Наряду с ними в крови содержатся связанные с белками полисахариды.

Особенно интенсивно глюкозу потребляют и используют для разнообразных нужд ткани центральной нервной системы, эритроциты, мозговое вещество почек.

В промежуточном обмене глюкоза используется для образования гликогена, глицерина и жирных кислот, аминокислот, глюкуроновой кислоты и гликопротеинов.

Концентрация глюкозы в крови является производной процессов гликолиза и окисления трикарбоновых кислот в ЦТК, гликогенеза и гликогенолиза в печени и мышечной ткани, глюконеогенеза в печени и почках, поступления глюкозы из кишечника.

В клинической практике обычно исследуют содержание глюкозы в крови, к определению концентрации других сахаров и гликогена прибегают значительно реже.

В крови человека глюкоза довольно равномерно распределена между плазмой и форменными элементами, установлено, что в венозной крови содержание сахара на 0,25‑1,0 ммоль/л (в среднем на 10%) меньше, чем в артериальной и капиллярной.

Известную диагностическую ценность представляет определение молочной и пировиноградной кислот, активности ряда ферментов углеводного обмена, сиаловых и гексуроновых кислот, серомукоидов, гликозилированного гемоглобина и других показателей.

глюкозы в моче зависит от ее концентрации в крови, хотя выделяется она как при нормальном, так и при повышенном уровне сахара крови.

При повышении концентрации глюкозы в крови преодолевается так называемый почечный порог (у здоровых людей лежит в области 8,3‑9,9 ммоль/л) и наступает глюкозурия.

При артериосклеротической почке, при диабете порог повышается и может не отмечаться глюкозурия даже при повышении концентрации глюкозы до 11,0‑12,1 ммоль/л.

Методы определения глюкозы в крови подразделяют на три группы: редуктометрические, колориметрические и энзиматические.

1. Редуктометрические методы:

  • титрометрический способ Хагедорна‑Йенсена основан на свойстве сахара восстанавливать при кипячении в щелочной среде железистосинеродистую и железосинеродистую соли калия. По степени этого восстановления титрометрически исследуют концентрацию сахара в крови. Важным преимуществом метода является дешевизна и возможность использования в любой лаборатории;
  • основанные на восстановлении нитробензолов, например, пикриновой кислоты в пикраминовую;
  • метод, основанный на способности глюкозы восстанавливать соли меди. Образующаяся одновалентная медь выступает в качестве промежуточного вещества. Окисляясь кислородом воздуха, она восстанавливает мышьяковомолибденовую или фосфорновольфрамовую кислоту, которые служат окончательным хромогеном.

Однако следует иметь в виду, что методы этой группы дают завышенные результаты (примерно на 20‑25%), так как в крови присутствует ряд соединений, не относящихся к углеводам, но обладающих восстановительными свойствами (мочевая кислота, глутатион, креатинин, аскорбиновая кислота);

2. Колориметрические методы. К ним относятся:

  • метод Сомоджи — реакция восстановления меди, находящейся в составе меднотартронового реактива, до закиси меди. Метод трудоемок, многостадиен, неспецифичен и в настоящее время практически не используется;
  • метод Фолина‑Ву — реакция восстановления тартрата меди в закись. Метод прост, недостатком является отсутствие строгой пропорциональности между интенсивностью получаемой окраски и концентрацией глюкозы;
  • определение концентрации глюкозы по Моррису и Роэ — дегидратация глюкозы под действием серной кислоты и превращение ее в оксиметилфурфурол, который конденсируется с артроном в соединение синего цвета. Требует чистейших реактивов и четкого соблюдения постояной температуры реакции;
  • ортотолуидиновый метод Гультмана в модификации Хиваринена-Никкила, состоящий в определении интенсивности окрашивания раствора, возникающего при взаимодействии ароматического амина ортотолуидина с альдегидной группой глюкозы в кислой среде. Этот способ точен и дает возможность более специфичного определения содержания глюкозы.
  • анилиновый метод, сохраняет чувствительность ортотолуидинового метода, но еще более специфичен.

3. Ферментативные методы:

  • основанный на гексокиназной реакции. Глюкоза под действием гексокиназы фосфорилируется за счет АТФ, образовавшийся Гл‑6‑Ф в присутствии дегидрогеназы восстанавливает НАДФ. Количество последнего определяют по увеличению светопоглощения в ультрафиолетовой области. Метод слишком дорогостоящий для практических лабораторий.
  • основанные на окислении глюкозы до глюкуроновой кислоты с помощью фермента глюкозооксидазы и образовании в ходе реакции перекиси водорода, которая (в разных модификациях):
◊ определяется химическим путем;
◊ при участии пероксидазы окисляет бесцветный ортотолидин, превращая его в окрашенное соединение зелено‑голубого цвета, прямолинейность зависимости окраски от концентрации глюкозы сохраняется в диапазоне от 1,1 до 22 ммоль/л;
◊ в присутствии фенола при участии пероксидазы окисляет 4‑амино­антипирин в окрашенное соединение розово-малинового цвета;
◊ в присутствии ионов меди окисляет фенолфталин до фенолфталеина, который в щелочной среде окрашен в красный цвет.

4. Электрохимические методы, в которых используются электроды, содержащие иммобилизованные ферменты, в частности, глюкозооксидазу. Реакция регистрируется по количеству образованной перекиси водорода или по убыли кислорода, израсходованного на окисление глюкозы.

5. Диагностические полоски, использующие глюкозооксидазно‑пероксидазную реакцию и производные бензидина в качестве хромогена.

В качестве унифицированных принято три метода: титрометрический метод Хаггедорна-Йенсена, ортотолуидиновый метод и глюкозооксидазный метод с окислением о‑толидина.

Принцип

Глюкоза при нагревании с ортотолудином в присутствии серной кислоты дает сине-зеленое окрашивание.

Нормальные величины

Цельная кровь (указанный метод)3,9‑5,5 ммоль/л
Плазма (тот же)3,9‑5,5 ммоль/л
Моча (тот же)0,06‑0,83 ммоль/л
или < 2,78 ммоль/сут

Определение содержания глюкозы глюкозооксидазным
методом по набору “Новоглюк”

Глюкозооксидазным методом можно определять количество глюкозы в сыворотке и плазме крови, цельной крови и спинномозговой жидкости.

Влияющие факторы

Завышенные результаты уровня глюкозы в крови наблюдаются после приема пищи, при применении кофеина, препаратов гормонов надпочечников, тироксина, пероральных контрацептивов, витамина РР (в больших дозах), диуретиков, при физических упражнениях, эмоциональном возбуждении и других стрессовых воздействиях. Влияние in vitro оказывают галактоза и другие моносахара сыворотки крови, аскорбиновая кислота, леводопа, метилдофа, парааминосалициловая кислота и другие.

Снижение концентрации отмечается после применения анаболических стероидов, антигистаминных препаратов, токсичных доз ацетилсалициловой кислоты, этанола. На результаты анализа влияет наличие гемолиза (выход глутатиона из эритроцитов), высокое содержание аскорбиновой и ацетилсалициловой кислоты в крови.

Кровь

Повышение концентрации глюкозы в крови (гипергликемия) отмечается при:

  • повышении гормональной деятельности гипофиза, надпочечников, щитовидной железы: феохромоцитома, тиреотоксикоз, акромегалия, синдром Кушинга;
  • заболеваниях поджелудочной железы: сахарный диабет (взрослый и юношеский), диабет беременных, острый и хронический панкреатиты, муковисцидоз, опухоли, гемохроматоз. Выраженная гипергликемия без кетоза встречаются у больных сахарным диабетом средней тяжести (или у лиц не страдающих им, с высоким уровнем эндогенного инсулина, предотвращающего развитие кетоза). глюкозы в крови может превышать 50 ммоль/л, в отличие от диабетического кетоацидоза, при котором уровень глюкозы вкрови часто ниже 33 ммоль/л;
  • хронических заболеваниях печени и почек;
  • раздражении ЦНС: кровоизлияния в мозг, травмы, опухоли, отравления окисью углерода, эфиром, синильной кислотой и т.п., менингит, эпилепсия;
  • остром инфаркте миокарда, тяжелой стенокардии, авитаминозе В1, при ожогах (первые сутки).

Гипогликемия встречается при:

  • заболеваниях поджелудочной железы: опухоль панкреатических островков, дефицит глюкагона;
  • тяжелых повреждениях печени: отравления мышьяком, хлороформом, алкоголем, салицилатами, антигистаминными препаратами, фосфором, тетрахлоридом углерода, бензолом, парацетамолом и т.п.;
  • заболеваниях печени, сопровождающихся нарушением гликогенообразования и глюконеогенеза;
  • эндокринных нарушениях: гипопитуитаризм, аддисонова болезнь, гипотиреоз;
  • заболеваниях почек с нарушением реабсорбции, заболевания кишечника с нарушением всасывания, большая потеря крови, несбалансированная диета и недоедание, спленомегалии у детей;
  • передозировке инсулина или пероральных противодиабетических препаратов.

Моча

Выведение глюкозы возрастает при всех случаях гипергликемии свыше 10 ммоль/л (почеч­ного порога). В этом случае глюкозурии могут быть физиологическими и патологическими:

  • к физиологическим относятся алиментарная глюкозурия, глюкозурия беременных и нейрогенная глюкозурия на почве стрессовых состояний,
  • патологическая глюкозурия обнаруживается при сахарном диабете, тиреотоксикозе, акромегалии, гиперплазии коры надпочечников, инфаркте миокарда, кровоизлияниях во внутренние органы, отравлениях морфином, фосфором, при острых инфекциях и нервных заболеваниях.

При нормогликемии глюкозурия может выявляться при повреждениях почечных канальцев — пиело- и гломерулонефриты, токсические поражения, почечный диабет (семейная почечная глюкозурия), нефропатии.

Снижение глюкозы в моче (вплоть до исчезновения) является признаком бактериурии.

Спинномозговая жидкость

Уровень глюкозы повышен при сахарном диабете, эпидемическом энцефалите, сифилисе ЦНС, гипергликемиях различной этиологии.

Уменьшение концентрации глюкозы определяется при остром пиогенном менингите, туберкулезном и криптококковом менингите, менингоэнцефалите, опухолях мягкой мозговой оболочки, саркоидозе.

Найти

Появился вопрос? Спрашиваем в группе

Глюкозооксидазный способ определения глюкозы

Определение глюкозы в сыворотке в крови: глюкозооксидазный и гексокиназный методы

Для определения концентрации исключительно глюкозы в различных жидкостях организма человека используют глюкозооксидазный метод. Преимуществом этого теста является его точность.

Диагностика в отличие от экспресс-методов позволяет выявить количество чистой глюкозы, без домеси к ней фруктозы и других сахаров. Принцип этой реакции заключается в окрашивании раствора, которое происходит вследствие взаимодействия окислителей со специфическими красителями.

Оценка результатов исследования проводится с помощью метода колориметрии и сравнения со стандартными растворами.

Когда назначается проведение глюкозооксидазного метода?

Этот тест используют для выявления нарушения толерантности к сахару и развития преддиабета, а также в стадии разгара болезни. Но для таких целей анализ используют редко, это связано с его высокой стоимостью и длительным ожиданием результата. Чаще всего определение глюкозы в крови и моче с помощью этого метода применяют при дифференциальной диагностике таких заболеваний, как:

  • синдром непереносимости лактозы;
  • непереносимость фруктозы;
  • выделение фруктозы с биологическими жидкостями организма;
  • повышенная концентрация пентозы в моче.

Несомненным достоинством глюкозооксидазного теста является его точность.

Что в основе этого способа?

При окислении сахара кислородом происходит выделение перекиси.

Существуют различные методы определения концентрации глюкозы в крови, но глюкозооксидазный является наиболее точным. Подоснова его состоит в том, что при взаимодействии сахара с кислородом воздуха происходит окисление реагента. В раствор выделяется перекись водорода.

Это вещество взаимодействует с ортотолуидином, образуя окрашенное соединение. Для поведения этой реакции необходимо присутствие специальных ферментов. При реакции окисления должна присутствовать глюкозооксидаза, а при окрашивании жидкости — пероксидаза.

Интенсивность окраски раствора будет зависеть от содержания глюкозы и быть более всего интенсивной при высоком ее содержании.

Суть глюкозооксидазного метода определения глюкозы

Оценка результата происходит с помощью количественного метода фотометрии через один и тот же промежуток времени. Обязательно использование калибровочного раствора, который содержит определенную заявленную норму сахара и, отталкиваясь от нее, можно судить о концентрации глюкозы в выделяемых жидкостях организма, чаще в крови.

Как проводится анализ?

Забор материала от больного осуществляется натощак. Для проведения теста используют венозную кровь в количестве 5 мл. Накануне диагностики больному показана строгая диета.

Это позволит судить о достоверности результата и исключить возможные погрешности анализа. За 2 дня перед изъятием крови пациент должен отказаться от вредных привычек употребления алкоголя и курения.

Также необходимо ограничить прием чрезмерно сладких блюд и по возможности избегать стрессовых ситуаций.
Для получения плазмы с сахаром проводится центрифугирование крови.

Чаще всего этот метод определения концентрации глюкозы выполняют способом центрифугирования, которым выделяют форменные элементы. Количество сахара определяют уже в плазме. При добавлении к ней всех необходимых реагентов окраска наблюдается через 20 минут, если тест проводится при комнатной температуре. Расчет уровня глюкозы проводится по калибровочному графику или с помощью правила порций.

Реактивы для исследования

Для определения сахара наиболее удобно использовать экспресс-методы определения глюкозы в крови. Это объясняется простотой в использовании и быстрым получением результата.

Кроме этого, больному не нужно идти в лабораторию или больницу. Но в отличие от глюкозооксидазного теста такая диагностика является недостоверной.

Так как не дифференцирует глюкозу от других сахаров и определяет их концентрацию вместе.

Основу глюкозооксидазной реакции составляет натрия хлорид 9% раствор и цинка сульфат 50%. Их добавляют на стадии центрифугирования крови. Кроме этого, используют буферный раствор с уксусной кислотой и ацетатом натрия.

Методом титрования определяют его рН на уровне 4,8.

После, добавляется глюкозооксидаза, из-за чего выделяется перекись водорода и пероксидаза, участвующая в окрашивании раствора до нужной концентрации для получения точного результата.

Нормы при проведении анализа

Измерение количества сахара происходит в специальных единицах — миллимолях на литр раствора.

Глюкозооксидазное исследование крови проходят обязательно на пустой желудок и используют для этого плазму или сыворотку. Норма количества ее для взрослых как для женщин, так и для мужчин составляет 3,3—5,5. Для детей до 15-ти лет этот показатель немного ниже и колеблется в пределах 3,2—5,3.

У новорожденных глюкоза крови составляет 1,7—4,2. Увеличение показателей наблюдается при развитии у больного сахарного диабета или при нарушении толерантности к глюкозе.

Это состояние является преддиабетом, и если его вовремя не лечить, то в скором времени оно приведет к развитию этой тяжелой патологии.

Определение содержания глюкозы глюкозооксидазным методом по набору “Новоглюк”

Глюкозооксидазным методом можно определять количество глюкозы в сыворотке и плазме крови, цельной крови и спинномозговой жидкости.

Алгоритм действий

Выполняя определенную последовательность действий, можно быть уверенным в точности проведенного анализа. Измерение глюкозы в крови нужно проводить в спокойной обстановке, поскольку эмоциональные всплески могут повлиять на достоверность результата.

Вот примерный алгоритм действий, который нужно совершить для корректного замера:

Допустимый уровень сахара в крови

  1. Вымыть руки с мылом под проточной водой.
  2. Насухо вытереть их полотенцем, при этом не растирая сильно кожу.
  3. Обработать место инъекции спиртом или другим антисептиком (этот шаг необязателен при условии, что укол будет совершаться одноразовой иглой или индивидуальной ручкой).
  4. Немного встряхнуть рукой, чтобы усилить кровообращение.
  5. Дополнительно просушить кожу в месте будущего прокола стерильной салфеткой или ватой.
  6. Совершить прокол в области подушечки пальца, снять первую каплю крови сухим ватным диском или марлевой салфеткой.
  7. Нанести каплю крови на тест-полоску и вставить ее во включенный глюкометр (в некоторых устройствах до нанесения крови тест-полоска уже должна быть установлена в аппарат).
  8. Нажать клавишу для анализа или дождаться вывода на экран результата в случае автоматической работы прибора.
  9. Зафиксировать значение в специальном дневнике.
  10. Обработать место инъекции любым антисептиком и после его высыхания вымыть руки с мылом.

Важно, чтобы перед исследованием на пальцах не было воды и других жидкостей. Они могут разбавить кровь и исказить результат. Это же касается любых косметических кремов, лосьонов и тоников.

Когда лучше измерять сахар и как часто это нужно делать?

Точное количество необходимых измерений в сутки больному может подсказать только наблюдающий врач. На это влияет множество факторов, среди которых можно выделить стаж болезни, тяжесть ее течения, тип недуга и наличие сопутствующих патологий.

Если помимо лекарств от диабета, больной систематически принимает медикаменты других групп, ему необходимо проконсультироваться у эндокринолога насчет их влияния на уровень сахара в крови.

В таком случае иногда бывает нужно внести определенные изменения во времени проведения исследования (например, мерить глюкозу до приема таблеток или по истечении определенного временного интервала после того, как человек их выпьет).

Нельзя сжимать и растирать подушечку пальца для улучшения притока крови, достаточно перед исследованием просто помыть руки с теплой водой

Когда же все-таки лучше измерять сахар? В среднем пациенту с хорошо скомпенсированным сахарным диабетом, который уже принимает определенные лекарства и соблюдает диету, достаточно 2-4 измерений сахара в сутки. Больным на этапе подбора терапии это приходится делать гораздо чаще, для того чтобы врач мог отследить реакцию организма на медикаменты и питание.

Самый детализированный контроль сахара в крови состоит из таких замеров:

  • Натощак после сна, до какой-либо физической активности.
  • Примерно через 30 минут после пробуждения, перед завтраком.
  • Через 2 часа после каждого приема пищи.
  • Через 5 часов после каждой инъекции инсулина короткого действия.
  • После физической активности (лечебной гимнастики, работы по дому).
  • Перед сном.
Поделиться:
Нет комментариев

    Добавить комментарий

    Ваш e-mail не будет опубликован. Все поля обязательны для заполнения.